کمپ ترک اعتیاد اجباری

کمپ ترک اعتیاد اجباری

کمپ ترک اعتیاد اجباری

Blog Article

غلظت آغازگرها بهینه شد. PCR های زمان واقعی با استفاده از SYBR Green I Master Mix و ABI 7000 Sequence Detection System (Applied Biosystems) انجام شد. هیچ محصول دیگری تقویت نشد ، همانطور که در یک منحنی ذوب برای هر نمونه نشان داده شد. ژن β-actin به عنوان نرمال کننده داخلی استفاده شد. چرخه آستانه ( C t ) برای هر نمونه با نمودارهای تقویت در مرحله لگاریتمی تعیین شد. بهره وری از تقویت برای آغازگر مقایسه بود، که توسط خطوط در قطعه Δ نشان C تی ارزش ها در برابر رقیق cDNA مربوط به (دامنه <0.1). داده ها با استفاده از روش 2 -ΔΔ C t توصیف شده توسط لیواک و اشمیتگن ( 2001) مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت) بیان AC به بیان β-actin برای هر ایزومر AC عادی شد. داده های آماری به صورت میانگین. SD ارائه شده است. برای وسترن بلات ، بافتهای NRM موشهای تحت درمان با دارونما و مورفین ( n = 6-8 موش در هر گروه) روی یخ به مدت 10 دقیقه در بافر حاوی 50 متر متر Tris-Cl ، 150 متر m NaCl ، 0.02 همگن شدند. متر متر نان 2، 100 میکروگرم بر میلی لیتر فنیل متیل سولفونیل فلوراید ، 1 میکروگرم در میلی لیتر آپروتینین و 1 درصد تریتون X-100. لیزات با دور 14000 دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه سانتی گراد سانتریفیوژ شد و مایع رویی برای SDS-PAGE استفاده شد. غلظت پروتئین با استفاده از کیت سنجش پروتئین Bio-Rad (Hercules، CA) تعیین شد. نمونه ها با بافر نمونه SDS در دمای 95 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه قبل از الکتروفورز با ژل 10٪ SDS پلی اکریل آمید تیمار شدند. تقریباً 20 میکروگرم پروتئین کل بارگیری شد. سپس پروتئین ها جدا شده و بر روی غشاء نیتروسلولوز انتقال داده شدند. نمونه ها یک شبه در دمای 4 درجه سانتی گراد با آنتی بادی اولیه برای AC (ACI ، 1: 1000 ؛ ACV/VI ، 1: 2000 ؛ ACVIII ، 1: 2000 ؛ بیوتکنولوژی سانتا کروز ، سانتا کروز ، CA) و برای β- اکتین (برای 1: 10000 ؛ سیگما آلدریچ ، سنت لوئیس ، MO). ایزوفرم های ACV و AVI نسبت به سایر انواع AC دارای همولوژیک توالی بیشتری هستند (Katsushika و همکاران ، 1992 ) ، و آنتی بادی حاصل از بیوتکنولوژی سانتا کروز (H-130) ACV و ACVI را به هم متصل می کند. پس از سه بار شستشوی 10 دقیقه ای با TBS حاوی 0.2٪ Tween ، لکه ها با آنتی بادی IgG بز خرگوش ضد بز خرگوش (1: 10000 ؛ Amersham Biosciences ، Arlington Heights ، IL) به مدت 1 ساعت در دمای اتاق با همزن ثابت و انکوبه شدند. سپس شستشو داده و با 3،3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride رنگ آمیزی می شود. غشاها با استفاده از کیت افزایش میزان کمیلومینسانس (ECL) Plus (علوم زیستی Amersham) توسعه یافته اند. شدت نوارها به صورت دیجیتالی ثبت شده و با نرم افزار Kodak (Rochester، NY) 1D ، نسخه 3.5.4 به صورت کمی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. واکنش پذیری کلیه ایزوفرم های AC به β-actin عادی شد.

ضبط ولتاژ کل گیره. تقریباً 192 موش برای ضبط کل سلول در برش های NRM در شرایط آزمایشگاهی استفاده شد . مغز یک موش صحرایی نر نوزاد (9 تا 14 ساله) از نژاد ویستار در یک ویبراتوم در سرم فیزیولوژیکی سرد (4 درجه سانتی گراد) بریده شد تا برش های ساقه مغز (ضخامت 200 میکرومتر) حاوی NRM بدست آید. یک قطعه تک در یک محفظه ضبط کم عمق غوطه ور شد و پرفیوژن با پیش گرم (35 درجه سانتی گراد) فیزیولوژیکی شور [حاوی موارد زیر (در متر متر ): 126 نمک طعام، 2.5 کلرور پتاسیم، 1.2 NAH 2 PO 4 ، 1.2 MgCl 2 ، 2.4 CACL 2 ، 11 گلوکز و 25 NaHCO 3 ، اشباع شده با 95٪ O 2 /5٪ CO 2، pH 7.2-7.4]. برش ها در طول آزمایش ضبط در -35 درجه سانتی گراد نگهداری شدند. موشهای صحرایی نوزادی برای تجسم بهتر نورونها در برشهای مغزی با میکروسکوپ مادون قرمز Nomarski استفاده شد. نشان داده شده است که ویژگیهای فیزیولوژیکی و دارویی نورونهای این موشهای جوان با موشهای بالغ قابل تشخیص نیست ( Pan et al.، 1997 ). تجسم تمام سلول ضبط ولتاژ گیره از نورون مشخص با یک پیپت شیشه ای (مقاومت، 3/5 مگا اهم) پر شده با یک محلول حاوی در بر داشت زیر (در متر ساخته شده بودند متر ): 126 گلوکونات پتاسیم، 10 مولار 1 MgCl 2، 11 EGTA ، 10 HEPES ، 2 ATP و 0.25 GTP ، pH با KOH تا 7.3 تنظیم شد. اسمولاریته ، 280-290 mOsm/L. از یک تقویت کننده Axopatch 1-D و نرم افزار AxoGraph 4.7 (Axon Instruments ، Union City ، CA) برای جمع آوری داده ها و تجزیه و تحلیل داده های آنلاین/خارج از خط استفاده شد. مقاومت آب بندی G2GΩ و مقاومت دسترسی ≤15 MΩ قابل قبول در نظر گرفته شد. مقاومت سری به طور مطلوب جبران شد. مقاومت دسترسی در طول آزمایش کنترل شد. همه سلولهای NRM که ثبت شده اند ، بر اساس معیارها به یک نوع سلولی که حاوی گیرنده μ- افیوئید (به نام "سلول ثانویه") یا نوع سلولی دیگر فاقد گیرنده μ (که به آن "سلول اولیه" گفته می شود) طبقه بندی شده اند. در مطالعه قبلی ما توضیح داده شد ( پان و همکاران ، 1990) محرکهای الکتریکی جریان ثابت (0.25 میلی ثانیه ، 0.2-0.4 میلی آمپر) برای برانگیختن EPSC با الکترودهای تحریک کننده دوقطبی جانبی (200-400 میکرومتر بر متر ) به الکترود ضبط کننده در NRM استفاده شد. یک جفت EPSC توسط دو محرک با فاصله 40 میلی ثانیه برانگیخته شد. نسبت پالس زوجی (PPR) با تقسیم دامنه EPSC دوم بر اول محاسبه شد. از PPR به طور گسترده ای برای تعیین محل عمل سیناپسی استفاده شده است ( Manabe et al.، 1993 ؛ Perkel and Nicoll، 1993 ؛ Dobrunz and Stevens، 1997 ؛ Ungless et al.، 2001 ؛ Bie and Pan، 2003) با احتمال آزاد شدن انتقال دهنده های عصبی پیش سیناپسی رابطه معکوس دارد. بنابراین کاهش PPR نشان دهنده افزایش انتشار فرستنده پیش سیناپسی و بالعکس است. EPSCs مینیاتور (mEPSCs) در 60 ثانیه دوره در حضور تترودوتوکسین به دست آمد (TTX؛ 1 μ متر ). از نرم افزار AxoGraph برای تشخیص و اندازه گیری دامنه و فواصل رویدادهای سیناپسی و تجزیه و تحلیل داده های توزیع آنها استفاده شد. دامنه I ساعت با تفاوت در مقادیر فعلی بین شروع و پایان گام ولتاژ 2 ثانیه ای ابرقطبی از پتانسیل نگه داشتن -50 میلی ولت تعیین شد. من ساعت داده مناسب با معادله بولتزمن، و سپس مقدار ولتاژ (بودند V 1/2) که در آن نیمی از حداکثر رسانایی فعال می شود از منحنی فعال سازی I ساعت تعیین می شود ( پان ، 2003b ). در برخی از آزمایش، برش NRM از موش مزمن تحت درمان مرفین در مهار AC انکوبه شدند سیس - N - (2-phenylcyclopentyl) azacyclotridec-1-EN-2-آمین (MDL12330a؛ 100 μ متر ) و یا در پروتئین کیناز A ( PKA) مهار کننده N - [2- ( ص -bromocinnamylamino) اتیل] -5-isoquinolinesulfonamide (H89؛ 10 μ متر ) برای حداقل 1 ساعت. شلیک پتانسیل های عمل با یک مرحله کنونی دپلاریزاسیون 3 ثانیه در کنترل ، در برش های خارج شده از مورفین و در برش های برداشت شده تحت درمان با I h برانگیخته شدمسدود کننده 4- ( N -ethyl- N -phenylamino) -1،2-دی متیل-6- (methylamino) پیریدینیوم کلراید (ZD7288؛ 10 μ متر برای> 1 ساعت). ZD7288 در 25-100 μ متر نشان داده شده است به صورت انتخابی جلوگیری از من ساعت در بسیاری از انواع سلول های عصبی مرکزی، از جمله سلول های عصبی μ گیرنده فاقد NRM ( هریس و کنستانتی، 1995 ؛ Khakh و هندرسون، 1998 ؛ Takigawa و همکاران ، 1998 ؛ لارکمن و کلی ، 2001 ؛ ملور و همکاران ، 2002 ؛ پان ، 2003 ب) تجزیه و تحلیل آماری mEPSC ها با استفاده از نرم افزار Statview (موسسه SAS ، Cary ، NC) با آزمون Kolmogorov-Smirnov انجام شد. داده های عددی دیگر با استفاده از آزمون t t Student تجزیه و تحلیل و به عنوان میانگین ± SEM ارائه شد. به طور کلی ، تنها یک نورون در یک تکه ثبت شد و از هر موش یک تا دو برش برای ضبط استفاده شد. داروها به طور کلی از طریق محلول حمام استفاده می شود مگر اینکه موارد دیگری مشخص شده باشد.

آزمایشات ریز تزریق و رفتار. موش های صحرایی نر نژاد ویستار (250-300 گرم) در دستگاه استریوتاکسیک با تزریق داخل وریدی مداوم متو هگزیتال (10 میلی گرم در میلی لیتر در 0.8 میلی لیتر در ساعت) بیهوش شدند. یک کانول دو طرفه 26 درجه ای به سمت NRM (قدامی خلفی ، -10.0 از برگما ؛ جانبی ، 0 ؛ شکمی ، -10.5 از دورا با جمجمه تراز شده) هدف قرار گرفت ( پاکسینوس و واتسون ، 1986) قرار دادن کنترل کانول 1.5 میلی متر پشتی به محل NRM بود. تأخیر در دم زدن به محرک حرارتی تابشی هر 2 دقیقه اندازه گیری شد. شدت گرما باعث ایجاد تاخیرهای پایه پایدار با زمان قطع 12 ثانیه شد. پس از شش آزمایش اولیه ، حساسیت ناشی از ترک (بیش فعالی) با تزریق نالوکسان (3 میکروگرم بر کیلوگرم ، IV) در موشهای صحرایی تحت درمان با مورفین ایجاد شد. داروها از طریق کانولا با دو پاشش 33 سنج با پمپ تزریق به میزان 0.5 میکرولیتر در دقیقه به NRM تزریق شدند. ZD7288 یا AP-5 و CNQX بلافاصله قبل از تزریق نالوکسان میکرو تزریق شد. MDL12330a ، H89 یا پروتئین نوترکیب cAMP (Rp-cAMP) 40 دقیقه قبل از نالوکسان به صورت میکرو تزریق شد. اثرات دارو از نظر آماری توسط ANOVA برای اندازه گیری های مکرر و آزمون توکی کرامر پس از عمل تجزیه و تحلیل شد.تحلیل و بررسی. برای بررسی بافت شناسی محل قرارگیری کانول ، 0.5 میکرولیتر متیلن بلو از طریق کانول دو تزریق تزریق شد. مغز موش در 4٪ پارافرمالدهید به مدت 30 دقیقه برش NRM ثابت شد، و سپس (200 μ متر ضخامت) قطع شد و برای قرار دادن کانول زیر میکروسکوپ مورد بررسی. داده های موش هایی که محل قرارگیری کانول در آنها خارج از منطقه NRM بود از نتایج حذف شد. مورفین و قرص پلاسبو با مهربانی توسط موسسه ملی سوء مصرف مواد مخدر ارائه شد. همه داروهای دیگر یا از سیگما آلدریچ یا از توکریس کوکسون (الیسویل ، MO) خریداری شده اند.

 

https://en.wikipedia.org/wiki/Drug

https://camp-srb.ir/compulsory-addiction-treatment-camp/

 

Report this page